囊胚期生殖二次冷冻复苏移植1例的出生结局和儿童发育情况随访

体细胞膜的冷藏保留是辅助受精技术(ART)治疗之中的关键一组转成部分，通过冷藏保留可以将病患者可避免的体细胞膜保留下来，大幅提高病患者的累积到产后所部。体细胞膜的 冷藏保留可以在体细胞膜发育不良的任意期中顺利进行，如有的区域内值得注意冷藏遗传物质期体细胞膜或卵裂期体细胞膜，现在随着人才体制的现代化，越来越多的IVF区域内顺利进行受精细胞膜培 豢养以期大幅提高产后所部和增高多胎产后所部，因此分析者越来越排斥于顺利进行受精细胞膜冷藏保留。冷藏分析方法可以为程序在 化慢速冷藏，也可以为乙酸乙酯冷藏。我们区域内自 2004年起，对第3天复制后的体细胞膜全部顺利进行受精细胞膜人才，如有受精细胞膜演化转成则顺利进行乙酸乙酯冷藏保留。然而在病理管理工作之中不常存在一些偶发的意以外情形，如病患者在的发展复制日因突发性或许没有顺利进行体细胞膜复制，只能将的发展的体细胞膜取走或其后冷藏后择期的发展复制。但是我们没有明确受精细胞膜二次乙酸乙酯冷藏后的相容性如何。迄今关于人类体细胞膜二次冷藏的史籍较少，尽管有史籍引述了一些发病并能在体细胞膜二次冷藏的发展复制后获活产，但这些引述多为第一次冷藏为遗传物质 期体细胞膜或卵裂期体细胞膜，的发展后人才至受精细胞膜其后冷藏[1。4]。Kumasako等[3]普遍认为二次冷藏会增高基底 胎的栽种所部，但是关于受精细胞膜冷藏的发展后其后冷藏复 苏复制的引述极少。且据我们所知，尚不分析来分 析受精细胞膜二次乙酸乙酯冷藏的发展复制后的以外祖母整部。在 此发病引述之中，我们描述了受精细胞膜二次冷藏的发展复制 后新的生儿的以外祖母整部，并回应病患者的女儿顺利进行长期以来 随访观察，详细记录了此孩童的身型发育不良情形。一、病理档案病患者34岁，未曾婚妻35岁，因输卵管因可抑制原发不孕 到我院受精区域内就诊，不孕天数6年。根据世界戍 生一民间组织常规，未婚变量较长时长。病患者2005年在本 区域内顺利进行生殖细胞冲动后**，在**间隔所选用的即刻 卵子建议按照本区域内的值得注意顺利进行，在上一间隔的朱 体期开始应用即刻性腺激可抑制释放激可抑制拮抗剂(GnRH-a)，当脑垂体超出降于调节后，用**冲动可抑制(FSH，果纳芬，搜索者)顺利进行生殖细胞冲动。当主导**半径超出18～ 20 rnlTl时，口服人绒毛膜即刻性腺激可抑制(HCG，艾泽，搜索者)，38 h后顺利进行超声驱使的**缝合来给与受精细胞膜。共获13枚受精细胞膜，顺利进行值得注意授精后， 13枚受精细胞膜体细胞膜，在体细胞膜后第3天观察体细胞膜的卵裂情形，挑选2枚优质体细胞膜顺利进行复制。复制后剩余的 11枚卵裂期体细胞膜经病患者坚称表示同意后全部顺利进行受精细胞膜人才，在体细胞膜后第5日或第6日分别观察受精细胞膜演化转成情形及形态。选用Gardner低分该系统受精细胞膜顺利进行低分，该病患者共演化转成2枚受精细胞膜，受精细胞膜低分分别为4BB和4BC。将所演化转成的受精细胞膜按照我区域内值得注意分析方法[5]顺利进行乙酸乙酯冷藏，全然一致操为：受精细胞膜冷藏之前顺利进行人工皱缩，即用电子束 系统在远离内细胞膜全团的滋豢养细胞膜连接薄弱处打孔，让囊腔液流不止，使细胞膜皱缩转成全团；然后将受精细胞膜放入含有7．5％DMSO和7．5％乙腈的预恒定液之中恒定 2 min，之后移入乙酸乙酯冷藏液之中恒定30 s，将体细胞膜转 移至冷藏马蹄形(cryoloop马蹄形)上，这样一来浸入液氮保留。 病患者好吃间隔复制未曾获产后，**3个月后患 者顺利进行冷藏受精细胞膜的发展复制。人工间隔准备肾脏，更年期 第2"-4天行值得注意B超检查，得到戊酸雌二醇(补佳乐，先灵，法国)施打，施打剂量根据病患者以往的肾脏情形 优化(2～18 rag／d)。B超监测肾脏落叶情形，当肾脏厚 度超出8 ITlln时低剂量朱体酮(20 rng×2 d，40 mgX 2 d，20--一40 mg×1 d)，口服后第6天行受精细胞膜的发展复制。复制之前1 d按照我区域内值得注意分析方法[5]顺利进行受精细胞膜的发展：准备受精细胞膜的发展液，在体细胞膜人才皿内盐酸0．33 mol／L、0．2 mol／L烟草氯化钠和基础人才液(GMoPS Plus， Vitrolife，芬兰)，从液氮之中取不止背著有受精细胞膜的冷藏马蹄形，空气 之中停留5 S后，将体细胞膜由南向北浸入上述的发展液之中，时长分 别为2 min、3 min和5 min。的发展后的2枚受精细胞膜大多顺利进行 电子束辅助长颈鹿出，选择在远离细胞膜全团的光亮背著上部位切割光亮背著的1／4左右。之后将受精细胞膜移人提之前准备好的 受精细胞膜人才液(G2，ⅥnDlife，芬兰)之中，放在37℃、6％OQ 和5％Q人才箱内人才16 h。复制之前观察受精细胞膜的扩张 和长颈鹿不止情形。 该病患者在受精细胞膜的发展复制日突发急性感冒不能 顺利进行受精细胞膜复制，在病患者坚称表示同意的某种程度下其后按照上述受精细胞膜乙酸乙酯冷藏操作步骤顺利进行体细胞膜冷藏。病患者左手 术6个月后其后顺利进行冷藏受精细胞膜的发展复制，全然一致操作步骤同上，受精细胞膜的发展后16 h顺利进行复制，病患者事与愿违产后，并于孕38周产后一助康女儿，可达52 CITI，腰围3 550 g。 由于这是本区域内第1例受精细胞膜二次冷藏的病患者，所以我们对其女顺利进行了长期以来的随访。女儿的叔叔身材矮小为 185 cm，母亲身材矮小为167 cm女儿1岁时，身材矮小83 cm， 腰围12 kg；3岁时，身材矮小97cm，腰围21kg，身体助 康，无疾病；5岁时，身材矮小117 cm，腰围31 kg；7岁时，身材矮小135cm，腰围40 kg；9岁时身材矮小154cm，腰围50 kg；12岁时，身材矮小168 cm，腰围62 kg；10岁时，不止现发育不良；12岁时更年期初潮。该女孩性格开朗，参加学教职员管乐队、教职员篮球队等集体活动，并争得极好的总分，其正不常人较长时长，学习总分在班级之前5名。二、讨论在此发病之中，病患者获13枚萌芽受精细胞膜，13枚受精细胞膜体细胞膜，经过人才后演化转成2枚受精细胞膜并玻璃 化冷藏保留。病患者在原计划受精细胞膜的发展复制日突发急性感冒，在其坚称表示同意的某种程度下将的发展后的受精细胞膜其后冷藏保留。此为病理管理工作之中一些难以避免的情形。如果将病患者体细胞膜取走非不常不甘心，而体细胞膜其后冷藏保留 的相容性尚不全然一致。到迄今为止，虽然早就有一些基底 胎在二次冷藏后获活产的发病引述，但都是第一次 体细胞膜冷藏时为遗传物质期或卵裂期体细胞膜，的发展后人才至受精细胞膜期中其后冷藏。本分析是首次对受精细胞膜二次乙酸乙酯 冷藏后获的活产顺利进行长期以来随访的发病引述。 有历史学家曾经用小鼠体细胞膜分析每一次冷藏的发展对体细胞膜的因可抑制，他们见到与未曾冷藏的体细胞膜相比，冷藏体细胞膜 在长颈鹿不止时的细胞膜数面有少，且小鼠体细胞膜并能在事与愿违的 每一次冷藏的发展3次后仅仅不全然一致以外发育不良意志力[6]。在此发病之中，我们对比了两次冷藏之前后受精细胞膜的形态学转变，第1次冷藏是在第5天，受精细胞膜为4期，运动速度为 4BB，第一次的发展后人才16 h，受精细胞膜全然长颈鹿不止，转成为 6期受精细胞膜，运动速度为6BB；第2次冷藏的发展后，人才16 h 受精细胞膜运动速度为6BB。受精细胞膜形态从以外观上看，两次冷藏后 没有欠异，受精细胞膜细胞膜存活较好，从未曾见过受精细胞膜期中体细胞膜的 二次乙酸乙酯冷藏对体细胞膜的发育不良无太大因可抑制。分析原 因，我们普遍认为可能与以下几个方面有关。首先，受精细胞膜在冷藏之之前顺利进行了电子束皱缩，将受精细胞膜腔内液全部放 不止，使受精细胞膜腔塌陷，待受精细胞膜全然皱缩后再继续顺利进行受精细胞膜的 乙酸乙酯冷藏，这样并能提高冷藏每一次之中冰晶的演化转成， 增高对体细胞膜的损伤。有分析也证实受精细胞膜的人工皱缩 并能有效大幅提高受精细胞膜冷藏后的发展的生存所部[7-9]。而且冷藏受精细胞膜的发展后的辅助长颈鹿出也非不常关键，在体细胞膜冷藏每一次之中，人类受精细胞膜的光亮背著凝固，会受限制体细胞膜的向以外长颈鹿 不止，有分析普遍认为受精细胞膜在扩张每一次之中不断地膨胀皱缩， 如果在光亮背著不止口处卡的单次多了，受精细胞膜就会衰亡[10]。而且，冷藏的发展后的受精细胞膜，由于即将的发展后囊 基底腔还处于皱缩状态，体细胞膜和光亮背著两者之间的连接处远比 相等卵裂期体细胞膜的连接处，因此受精细胞膜的辅助长颈鹿出越来越安全。我们的数据见到，未曾经过辅助长颈鹿出的受精细胞膜，的发展后过夜人才，全然长颈鹿不止的比例(340A)远很低电子束长颈鹿出后的受精细胞膜(85％)，越来越高的长颈鹿不止比例意味着越来越高的着床 机会。其次，受精细胞膜的冷藏保留不同于卵裂期体细胞膜，它 自身有很多优点。并能发育不良至受精细胞膜期中的体细胞膜经过 二次选择，发育不良意志力极度的体细胞膜早就被止步；受精细胞膜的 细胞膜比所部多，尤其是滋豢养细胞膜层细胞膜，损伤后修复意志力过关斩将，少数细胞膜死亡后对体细胞膜发育不良意志力因可抑制小；受精细胞膜 的细胞膜越来越小，呈圆形梭形，表面积／表面积比大，对失水、复水造转成的表面积转变耐受性极好[11]。因此我们猜测受精细胞膜 二次冷藏后细胞膜没有损伤的或许可能来源不明。 迄今虽然有一些体细胞膜二次冷藏获活产的报 道，但是对新的生儿长期以来随访的引述非不常少见。在此发病之中，受精细胞膜经过二次乙酸乙酯冷藏后，仅仅并能事与愿违 栽种，病患者在足月产后一较长时长腰围的新的生儿，也示意 受精细胞膜二次冷藏似乎非不常因可抑制新的生儿的以外祖母整部。复习史籍，我们见到在2011年的一项小型分析之中，作 者分析了一次冷藏和二次冷藏后体细胞膜以外祖母整部的欠 异[12]。在一段话一次冷藏，就是将2PN期或卵裂期的体细胞膜顺利进行冷藏保留，的发展后复制；二次冷藏指的是 冷藏的体细胞膜的发展后顺利进行体以外人才至受精细胞膜期中，再继续进 行冷藏。结果示意二次冷藏一组的双胎所部很低一次冷藏一组，他们普遍认为是二次冷藏一组复制的体细胞膜数较少造 转成的。此分析还示意二次冷藏一组的以外祖母腰围高得多 一次冷藏一组，尽管没有统计学欠异；在二次冷藏一组未曾 牵涉到总括极度，在一次冷藏一组牵涉到1例总括极度；两 一组大多未曾牵涉到发育不良或新的生儿死亡。尽管这些并非受精细胞膜 二次冷藏的分析，但从一定程度上再继续现了体细胞膜在二 次冷藏后非不常因可抑制新的生儿的以外祖母整部。我们回应新的 生儿随访至9岁，该孩童身型发育不良较长时长，正不常人发育不良正 不常，心理发育不良较长时长。与之之前冻融体细胞膜复制(FET)不止 生孩童的随访结论原则上[13,7]。Pelkonen等分析 了FET以外祖母女儿的总括极度的牵涉到情形，普遍认为 FET以外祖母女儿牵涉到总括极度的比例与好吃复制相像，之后Pelkonen等[14]对FET始祖女儿顺利进行了一 项随访3年的分析，见到FET与好吃复制以外祖母始祖 的身型发育不良是相像的。还有分析见到ART后以外祖母 始祖的中枢神经系统运动所发育不良方面与纯净产后始祖无总体欠 异，普遍认为他们的中枢神经系统发育不良、社会感情及语言学习并无 欠异[117]。可见体细胞膜冷藏对新的生儿长期以来发育不良的影 放与好吃复制体细胞膜相像。而从我们的发病引述来 看，受精细胞膜的二次冷藏也是相比较安全的。 我们将受精细胞膜二次乙酸乙酯冷藏后的体细胞膜顺利进行复制 后获事与愿违产后，足月产后一助康女儿，并顺利进行长达12年的随访，此孩童身型发育不良较长时长，正不常人发育不良较长时长，心理发育不良较长时长。普遍认为此受精细胞膜二次冷藏后体细胞膜仅仅不具极好的栽种想像力和发育不良想像力。但此发病仅为个例引述，受精细胞膜每一次冷藏是否是会造转成体细胞膜的损伤仍未详 确，复制每一次冷藏的体细胞膜是否是安全还需要必要性的分析，因此在病理管理工作之中，我们仍应尽可能避免体细胞膜的每一次冻融。参考史籍面有。重构不止处：王雪，甄绿然，孙正怡，郁琦等，受精细胞膜期体细胞膜二次冷藏的发展复制1例的以外祖母整部和孩童发育不良情形随访[J],受精医学杂志，2018,27(12).